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蜀科離心機(jī)分離植物細(xì)胞膜實(shí)驗(yàn)方法

更新時(shí)間:2016-03-30      點(diǎn)擊次數(shù):2319

  蜀科離心機(jī)廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)科學(xué)、生物工程、食品、化工、制藥、環(huán)保等科研和生產(chǎn)單位。今天給大家簡(jiǎn)單介紹一個(gè)用蜀科離心機(jī)分離植物細(xì)胞膜的實(shí)驗(yàn)供大家參考。我們選用的是蜀科的臺(tái)式高速大容量冷凍離心機(jī)
*步,組織破碎,也可以用研磨的樣本。如果存在大量粗纖維的話,你還可以用紗布過濾一下。裂解液配方,0.55M 蔗糖;0.76M Tris; 0.02M EDTA; 0.03M 抗壞血酸。用Hcl 調(diào)整HP 到7.8。原料/裂解液 1:2。
第二步,研磨液分3次用蜀科低速冷凍離心機(jī)分離出那些不需要的組織殘?jiān)蚣?xì)胞器。 100G 10min ; 3000G 5min ; 17000G 15min。(速度不夠的話適當(dāng)延長時(shí)間,否則懸浮液中會(huì)存在大量的線粒體之類的細(xì)胞器)。
第三步,上一步得到的懸浮液是含有總膜的懸浮液,一般情況下, 下一步應(yīng)該利用高速離心20000G以上的離心力,把所有的膜沉淀出來進(jìn)一步純化(這里好用蜀科高速離心機(jī),推薦選用臺(tái)式高速大容量冷凍離心機(jī),離心力如果不夠分離不出來,如果原料非常多的話可能會(huì)析出一些,你也可以試著改變下裂解液的蔗糖濃度,理論上密度變了以后沉降系數(shù)也會(huì)改變,不過這個(gè)要做大量的計(jì)算工作以確保不影響膜的純度)。純化有PEG/Dextran; 蔗糖梯度兩種方法, 蔗糖梯度比較老了,效果不是很好,但是蔗糖很便宜很好弄。我們用的是6.3%PEG/Dextran 。

   因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中需要全程保持0-4度的溫度,所以選用的是蜀科的冷凍離心機(jī),了解更多實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)操作方法,請(qǐng)收藏并繼續(xù)關(guān)注我們的。

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